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NEWSYF®488Click-iTEdU细胞增殖检测盒常见问题解答 - 尊龙凯时品牌指南
来源:满眉武 日期:2025-03-16尊龙凯时的YF®488/555/594/647在荧光标记中有什么不同之处?主要区别在于它们用于检测EdU时所带的荧光基团,这导致检测时发射的荧光颜色各异。虽然实验效果相似,但您可以根据个人偏好或实验需求进行选择。
在尊龙凯时的EdU试剂盒中,固定后的3%BSA于PBS的作用是什么?在洗涤步骤中,BSA能够有效终止未反应的甲醛,帮助提高实验的准确性。
是否可以在活细胞中进行Click-iTEdU检测?不可以。尽管EdU能对活细胞进行代谢标记,但叠氮化物检测试剂和缓冲液的成分均为细胞非透过型,因此Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应是否兼容?检测的顺序如何?需要注意的是,尊龙凯时的产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,因此在染色后无法直接检测GFP,建议使用GFP抗体进行间接检测。
如果观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?叠氮化物和炔烃类之间的Click反应具备很强的选择性,生物体内几乎不会发生副反应,因此高本底干扰通常是由洗涤不充分造成的。解决此问题的最佳办法是增加BSA洗涤的次数。同时,建议设置一组不含染料或无Click反应的对照,以排除自发荧光的干扰。您也可以在无EdU体系中进行完整的Click反应,以验证Click反应信号的特异性。
为什么标记样品没有信号或特异性信号非常低?如何提高信号?以下几点可供参考:1. 确保所用试剂呈无色状态,切忌使用已变色的添加剂或缓冲液;2. 为了确保Click反应试剂能有效进入细胞核,细胞需充分固定和通透;3. 铜离子可能会与部分试剂结合,导致催化Click反应的有效浓度降低。因此,在Click反应前应避免在缓冲液或试剂中添加金属螯合剂(如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)。某些样品可能需要额外的洗涤步骤;4. Click反应中的铜离子需处于一价铜状态(Cu+)才能有效;5. 延长Click反应时间至超过30分钟可能并不会提高信号,建议使用新鲜的Click反应试剂再进行30分钟的孵育,以有效提升标记效率。
如何对细胞核进行复染?尊龙凯时的试剂盒中配有Hoechst 33342,可用于在Click反应后对细胞核进行染色,您也可以选择使用DAPI。EdU是否能够用于检测植物细胞核内的DNA复制?可以,因为EdU作为小分子能够穿透植物细胞的细胞壁。
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